Названиепродукта
Родовоеимя:Набордляснятиянуклеиновойкислоты
Коммерческоеназвание: вируснаяДНКиРНКбыстрыйнабордляснятия(Spin-рулевойколонки)
Упаковка
DP4611(50 сеансов) /DP4612(100 сеансов) /DP4613(200 сеансов)
Использованиепоназначению
ДляизоляцииивысокоекачествоочисткиДНКвируса/РНКизклетоккрови,
Сыворотку, телевизорсплазменнымэкраном, лимфы, acellular жидкости, supernatant культурыклетокилиразличныхвирусов
Сохранениежидкости.
Принцип
Вкомплектотноситсякуникальнойпривязкибуфер/ Protease K быстроLyse nuclease отвирусов
Иотключитьвирус.ЗатемгеномнойДНКиРНКизбирательнопоглощаетдоSilicified
Мембранаврастворсоли.Загрязнения, такихкаксотовыеметаболитовибелкиит.д.
СнимаютсячерезсериюизElution- центрифугированияшаги.Инаконецочищенной
ГеномнойДНКиРНК- eluted изкремниямембраныснизкимсолиElution буферEB.
Храненияисрокдействия
1.Proteinase K (сухойпорошок) заноситсявпамятьпри-20±5°C;буферRW могутбытьсохраненывсоответствиис
2~8ºC втечениеодногомесяцаи-20±5°C втечениеодногогода;другиекомпонентысохраняютсявсоответствиис
Температуравкомнате.
2.Этоткомплектдолженбытьдействительнымвтечениеодногогода.Используйтееговегодействительности.
Применимыхдоговорах
ДаннаямодельподходитдляBenchtop BioTeke CR3180 свысокойскоростьюохлажденныхцентрифуги
Ианалогичныхинструментов.
Требованиявотношенииобразцов
Используйтеновыеобразцыилиобразцы, которыехранятсядолжнымобразом.Мыпредлагаемэкспериментов
Бытьвыполненыкакможноскорееобразцымогутбытьсобраны.Хранитепробына2~8 ºC
Временноилина-20ºC или-80ºC длядлительногосохранения.
Процедуры
* ДобавьтеабсолютнойэтиловыйспиртвстиральнойбуферWB, какуказано
Преждечемиспользовать!
ПодготовкаProteinase K:
Добавить1000lab μL водувкаждыйкусокProteinase K(сухойпорошок) (окончательный
Концентрация40 мг/мл).Смешайтееговверхдномвдесятьраз, покаонаполностьюнерастворятся.
Хранитеегов2~8ºC длякраткосрочногоиспользованияи-20 ±5°C длядолгосрочногохраненияданных.Чтобыизбежать
Неоднократныезамораживанияиоттаиваниядляболеечемвпятьраз.
1.Добавьте200 μL жидкихобразцов(сыворотку, телевизорсплазменнымэкраном, кровиит.д.) втрубкеспомощьюцентрифуг1.5mL.
Дляпервоначальногообъемажидкихобразцовменее200 μL, добавьте 1×PBS, покаонане200μL.Еслипервоначальныйобъемнаходитсямежду200 μL-300μL, добавьтереагентов
Пропорциональновпоследующихпроцедур.Образцытканей, шлифовка
Во-первых, использовать200 μL буферадоResuspend, азатемдобавитьеговбуферLysis вирусов.
2.Добавить 500 μL вирусаLysis буферVL1.Добавить20μL отProteinase K (40 мг/мл).
Эффектдрожаниякамерывтечение15 секунддляобеспечениядостаточнойзаслонкисмешениявоздушныхпотоков.Затем incubate на65ºC втечение15 минут.Входе
Инкубаторовможносмешатьеговверхивнизвтечение3-4 раз.
3.Добавить300 µL абсолютнойэтиловыйспиртизатем встряхнитееговверхивниздлясмешивания
Тщательно.
Надлежащейчисленностиитщательносмешатьимеетвесьмаважноезначениевуказанныхвышепроцедур.
Врезультатесмешениявоздушныхпотоковнедостаточнонизкаяурожайностьнуклеиновыекислоты.
4.ПереносрешенияиFlocculated осадков(еслиесть) встолбцевращения
VI (спинарулевойколонкивколлекциитрубки).Центрифугина10000 об/минвтечение30 секунд, ипустой
Фильтратвколлекциитрубки.
5.Добавить700µL буферныхRW (просьбаобеспечитьабсолютнуюэтиловыйспиртдобавляетсяпередиспользованием)
Ивоб/мин12,000центрифугдля30s.Выбросьтефильтрат.
6.Добавить500 µL буферныхRW (просьбаобеспечитьабсолютнуюэтиловыйспиртдобавляетсяпередиспользованием)
Ивоб/мин12,000центрифугдля30s.Выбросьтефильтрат.
7.УстановитеSpin колонкеVI обратновтрубуисбораданныхспомощьюцентрифугв13,000об/миндля
2 мин.Снимитестеклоомывателибуфер, еслиэтовозможно.Впротивномслучаеостаткиэтанолбудутвлиятьна
Следующийответ.
8.ПередачавращенияколонкиVI нановуютрубкуспомощьюцентрифугидобавить30-50µL прогретьохлаждающуюжидкость
(65 °C -70 ºC waterbath ) буферEB к серединеадсорбционноготипапленки.Поместитееена
Прикомнатнойтемпературевтечение2 мин.Центрифугина12,000об/минвтечение1 мин.), залейтерастворвпобочныхрезультатов
Колонкиипоместитеееприкомнатнойтемпературевтечение2 мин.Центрифугина12,000об/минвтечение1 мин.
9.ДНКможетхранитьсяна2-8ºC и-20ºC длядолгосрочногохраненияданных.Лучшедлязаднегохода
ПреобразоватьРНКвCfDNA илихранитьРНКна-80ºC.
Производительность
1.Этотнаборможноиспользоватьдляизвлеченияизнуклеиновойкислоты, телевизорсплазменнымэкраномисывороткикрови
Эффективно
2.Результатыэтогокомплектаявляютсястабильнымииповторяемости.
Особоевнимание
1.ДобавьтеэтанолавбуфереRW, преждечемиспользовать(добавить60 млPf этанолав
15млRW или100млэтанолав25млRW или200млэтанолав50млRW) исмешайте
Еетщательно).Проверьте, чтобыизбежатьповторныхдобавление!2.Чтобыизбежатьуменьшаетсяактивностьиоблегчениятранспортировки, protease K -
Всухойпорошок.Послеполучения, обратитесьвближайшеевремяцентрифугидобавить1 мл
Стерильнойводойдлярастворенияприлипшихостатковпрокладки(окончательныйконцентрация 40 мг/мл).Какнеоднократнозаморозить
ИбылобыуменьшитьProtease оттаивания.Разделитепакеты(20μL на
Пакет) сразужепослераспадаисохранитьегопод-20ºC.
3.Крышкакрышкаплотнопослезавершенияспомощьюрешенийдляпредотвращенияиспарения,
Окислениеиизменениефазызначенияпоследлительноговоздействиявоздуха.