Кит теста ЭЛИЗА на метаболит нитрофурантоина (AHD) Kwinbon

• Индивидуализация: Доступный
• Классификация: диагностика продуктов питания
• Транспортная Упаковка: картонная коробка
• Модель №.: KA00407H
• Торговая Марка: квинбон
• Происхождение: Китай
• Код ТН ВЭД: 38229000
• Производственная Мощность: 500 000 штук в год

Описание Товара

Описание продукта

 

Комплект для иммуноферментного иммуноанализа Competitive Enzyme
Количественный анализ нитрофурантоина метаболита (AHD)  
 

1. Общая информация
Нитрофураны —  синтетические антибиотики широкого спектра действия, которые часто используются в производстве животных для антибактериальных и фармакокинетических свойств. Они также использовались в качестве стимуляторов роста в свиноводстве и производстве водной продукции. Исследования с экспериментальными животными родительские препараты и их метаболиты показали , что эти препараты канцерогены и мутагены. Это привело к запрету нитрофуранов на лечение животных, используемых для производства продуктов питания. В 1993 году в ЕС были запрещены препараты нитрофуран-фуратадон, нитрофурантоин и нитрофуразон, а в 1995 году использование нитрофурантоина было запрещено.
Поскольку родительские препараты очень быстро метаболизируются, а связанные тканью метаболиты нитрофуран будут сохраняться в течение длительного времени, поэтому метаболиты используются в качестве мишени при выявлении злоупотребления нитрофурантами, например  , метаболит фуразолидона (АОЗ), метаболит фуратадона (АМОЗ), метаболит нитрофурантоина (АУЗ) и нитромеразит (ЭМ).
AHD чаще всего определяется ЖХ-МС или ЖХ-МС/МС. Иммуноферментные анализы, по сравнению с методами хроматографии, демонстрируют  большие преимущества в отношении чувствительности, предела обнаружения, технического оборудования и требований к времени.
2 принцип проверки
Этот комплект ELISA предназначен для обнаружения метаболита нитрофурантоина (AHD) на основе  непрямого  иммуноферментного анализа. Колодцы микротитра покрыты антигеном, связанным с ППТ. AHD в образце конкурирует с антигеном, покрытого на пластине микротитра для антител. После добавления  конъюгата фермента используется хромогенный субстрат и сигнал измеряется спектрофотометром. Абсорбция обратно пропорциональна концентрации AHD в образце.
3. Применение
Этот комплект используется для количественного и качественного анализа AHD в меде.
4. Перекрестные реакции
Метаболит нитрофурантоина (AHD)............................ …100%
Метаболит фуразолидона (AOZ)........................ <0.1%
Метаболит Фуральтадона (AMOZ)......... ….….<0.1%
Метаболит нитрофуразона (SEM)......... ….…..<0.1%
Фуразолидон А. …......... …...…<1%
Фуртадоне...................... …...... …<1%
Нитрофурантоин............................ …13%
Нитрофуразон........ ….............................. <1%
5. Необходимые материалы
5.1 Оборудование
----спектрофотометр с пластинами Microtitter (450 нм/630 нм)
----------------------
----гомогенизатор
----Шакер
----Vortex микшер
---- Центрифуге
----Аналитический баланс (индуктивность: 0,01g)
---- градуированная пипетка: 10 мл
----резиновая лампа пипетки
----объемный коллаж: 100 мл, 1 л.
----- стеклянная тестовая пробирка: 10 мл
-----пробирка для центрифугирования из полистирола: 2 мл, 50 мл
---микропипетки: 20ul-200ul,
100ul-1000ul, 250ul-мультипипетка
5.2 Реагенты
----Этилацетат (AR)
----n-гексан (или нормальный гептан) (AR)
----Дикалийный тригидрат фосфата водорода
(K2HPO4.3H2O) (AR)
----метанол (AR)
---- концентрированная соляная кислота (HCl, AR)
----гидроксид натрия (NaOH, AR)
----деионизированная вода
6. Компоненты комплекта

1. Микротироватная пластина с 96 лунками, покрытая антигеном
2. Стандартные решения AHD. (1 мл × 6 бутылок)

0ppb, 0.025ppb, 0.075ppb, 0,225ppb, 0,675ppb, 2,025 мкг/л.

1.  Стандартный раствор для шипования: 1 мл, 100 мкг/л.
2. Концентрированный фермент конъюгата 1 мл….......красная крышка
3. Раствор для конъюгатного ферментного разбавления 10 мл…зеленый колпачок
4. Раствор 7МЛ  ..….......…......…...белый колпачок
5. Раствор B   7 мл.........................…красный колпачок
6. Остановить раствор   7мл............... желтый колпачок
7. 20 × концентрированный раствор  для мытья  40 мл...прозрачный колпачок
8. 2 × концентрированный раствор для экстракции  50 мл….... синяя крышка
9. 2-нитробензальдегид  15,1 мг ... ... ... черная крышка

7. Подготовка реагентов:
Решение 1: Производный реагент:
Добавьте метанол в бутылку с 2-нитробензальдегидом и разбавленный до 10 мл. (Конечная концентрация составляет 10 мм)
Решение 2: 0,1 М K2HPO4:
Растворите 22,8 г K2HPO4.3H2O  деионизированной водой, разбавьте до 1 л.
Решение 3: Раствор 1M HCl :
Разбавьте концентрированную соляную кислоту 8,3 мл деионизированной водой, разбавьте до 100 мл.
Решение 4: 1M NaOH:
Вес гидроксида натрия 4g (NaOH) растворяется в деионизированной воде, разбавлена до 100 мл.
Решение 5: Раствор для удаления:
Разбавьте раствор 2×экстракта деионизированной водой в соотношении 1:1, который будет использоваться для извлечения образцов. Раствор для разбавленной экстракции может быть в течение месяца при 4°C.
Решение 6: Промывочный раствор:
Разбавлите концентрированный раствор 20×WASH деионизированной водой в соотношении 1:19, который будет использоваться для промывки пластин. Раствор для разбавленной стирки можно использовать в течение месяца при температуре 4°C.
8. Подготовка образца
8.1 Уведомление и меры предосторожности  перед эксплуатацией
(A) используйте разменные наконечники в процессе эксперимента и меняйте наконечники, если поглощается другой реагент.
(b) убедитесь, что все экспериментальные инструменты чистые.
(c) производный реагент может храниться в течение полугода при температуре 2–8 °C.
(d) храните необработанный образец в замороживании.
(e) обработанные образцы можно хранить в темное время суток, 2–24 °C.
8.2 Хоней
----взвесьте 1.0±0,05 г меда в пробирку для центрифугирования с полистиролом объемом 50 мл;
----Добавить 4 мл деионизированной воды, встряхните для растворения;
----Добавить 0,5 мл 1M HCl (раствор 3) и производный реагент (раствор 1) 100ul и полностью встряхивать в течение 2 минут с помощью встряхивателя.
---- инкубация при 37°C ночью (ок. 16 часов).
---- Добавить 0,1 М раствор K2HPO4  (раствор 2) 5 мл, 1M NaOH (раствор 4) 0,4 мл и этилацетат 5 мл, полностью встряхните в течение 30 с встряхивателем.
-----Центрифуге: 10 мин, не менее 3000 г, при 20-25°C.  
----перенесите надосадочную этилацетатную смесь 2,5 мл в сухую стеклянную центрифужную пробирку (10 мл) и высушите при 50–60 °C с помощью газообразного азота с водяной баней.
----растворите остатки с 1 мл n-гексаном (или n-гептаном) и вихревой в течение 30 с, затем добавьте 1 мл раствора для экстракции (раствор 5) и вихревой в течение 1 мин.  Не допускайте эмульгирования во время вихревой процедуры, а затем перенесите его в пробирку из полистирола объемом 2 мл.
-------------------------------------------------  20  
----- удалите фазу надосадочной жидкости и используйте 50UL на колодец слоя субстрата   для анализа.
9. Процесс анализа
9.1 Примечание перед анализом:
9.1.1 убедитесь, что все реагенты и микролунки находятся при комнатной температуре (20–25 °C) более 30 минут до разогрева.
9.1.2 сразу после использования верните все остальные реагенты на 2–8 °C.
9.1.3 правильно промывание микролунки является важным этапом процесса анализа, это жизненно важный фактор воспроизводимости анализа ELISA.
9.1.4 не допускайте попадания света и накрывайте микролунки во время инкубации.
9.2 процесс анализа:
9.2.1 извлеките все реагенты при комнатной температуре (20–25 °C) более 30 минут, осторожно встряхните перед использованием.
9.2.2 извлеките микролунки и сразу же поместите их в пакет с застежкой на молнии при температуре 2–8 °C.  
9.2.3 перед использованием разбавленный промывочный раствор необходимо довести до комнатной температуры.
9.2.4 номер: Пронумерованные позиции микролуек, а все стандарты и образцы должны быть пронумерованы в дублирующихся экземплярах. Запишите положения стандартов и образцов.
9.2.5 Добавить стандартный раствор/образец:  Добавить 50 мкл каждого стандартного раствора или приготовленный образец в соответствующие скважины.
9.2.6 Premix: Смешайте раствор конъюгата фермента и концентрированный конъюгат фермента в соотношении 10:1, осторожно встряхните. Примечание: Смесь ферментов не может быть конъюгата, используйте ее немедленно.
9.2.7 Добавить смесь конъюгата фермента: Добавить 50 мкл смеси антител-фермента. Осторожно перемешайте, встряхнув пластину вручную, и поместите в инкубаторе в течение 30 минут при 25 °C с крышкой.
9.2.7 Wash (  6 мойка): Осторожно снимите крышку и вылейте жидкость из колодцев, а затем промойте микролунки раствором 250 мкл разбавленного моющего средства (раствор) с интервалом 10 с. Сильно постучите по держателю микролунки вверх дном, чтобы полностью удалить жидкость из колодцев (повторите 4-5 раза).
9.2.8  окрашивание: Добавьте 50 мкл раствора A и 50 мкл раствора B в каждую лунку. Осторожно перемешайте , перемешивая пластину вручную, и высируйте в течение 15 минут при 25 °C с крышкой (см. 12.8).
9.2.9  Измерить: Добавить 50 мкл раствора остановки в каждую лунку. Осторожно перемешайте, покачивая пластину вручную, и измерьте поглощение при 450 нм  (рекомендуется использовать двухволновой 450 нм. Считайте результат в течение 5 минут после добавления раствора остановки)
10. Результаты
10.1 процентное поглощение
Средние значения поглощения, полученные для стандартов, и образцов разделяются на значение поглощения первого стандарта (нулевой стандарт) и умножаются на 100%. Таким образом, нулевой стандарт равен 100%, а значения поглощения приведены в процентах.
=
B --поглощение стандартного образца (или образца)
B0 — поглощение нулевого стандарта
10.2  Стандартная кривая
----- для построения стандартной кривой: Значение поглощения стандартов по оси y, поллогарифмическая концентрация стандартов (ppb) по оси x.
----концентрация AHD каждого образца  (ppb), которая может быть считана с калибровочной кривой, умножается на соответствующую степень разбавления каждого образца, а также получается фактическая концентрация образца.
Обратите внимание:
Для анализа всех данных разработано специальное программное обеспечение, которое  может быть предоставлено по запросу.  
Фактор разбавления образцов:  2.
11. Чувствительность, точность и точность
Чувствительность теста: 0,025 мкг/л.
Предел обнаружения.................... 0,05 мкг/л.
Точность........................ 100±30%
Точность:  CV комплекта ELISA составляет менее 10%.
12. Примечание
12.1 средние значения поглощения, полученные для стандартов, и образцы будут уменьшены, если реагенты и образцы не были нагреваются до комнатной температуры (20–25 °C).
12.2 не допускайте высыхания микролунок между этапами, чтобы избежать неудачного повторения и сразу же после касания держателя микролунок выполните следующее действие.
12.3 перед использованием осторожно встряхните каждый реагент.  
12.4 держите кожу вдали от раствора остановки, так как это раствор H2SO4 ДЛИНОЙ 0,5 М.
12.5 не используйте комплекты, срок годности которых не был устарел. Не обменивайте реагенты разных партий, иначе это приведет к падению чувствительности.
12.6 храните комплекты ELISA при температуре 2–8 °C, не замораживайте их. Во время всех инкубаций избегайте прямого солнечного света. Рекомендуется накрыть пластины микротира.
12.7 раствор подложки следует отказаться, если он окрашивается в цвет.  Реагенты могут стать некачествами, если значение поглощения (450 нм) нулевого стандарта меньше 0.5 (450 нм<0.5).
12.8 Окрашивание должно быть в течение 10 минут после добавления раствора A и раствора B; однако можно продлить период инкубации до 20 минут, если цвет слишком светлый, чтобы его можно было определить, никогда не превышайте 25 минут. Наоборот, сократите время инкубации надлежащим образом.
12.9 оптимальная температура реакции составляет 25°C. Выше или
более низкая температура приведет к изменению чувствительности
и значения поглощения.
13. Условия хранения и период хранения
Условия хранения: 2–8°C.
Срок хранения: 12 месяцев
 

Подробные фотографии

 

Профиль компании